【五分钟讲实验】HT22细胞系不同体外模型研究分析！

HT22细胞系作为小鼠海马神经元细胞系，是体外研究谷氨酸毒性的良好模型，HT22细胞主要用于神经退化性疾病的研究，如阿尔茨海默病和帕金森病。

在神经退化性疾病的研究中，HT22细胞系具有以下具体应用：

甲醛(Formaldehyde，FA)是一种常见的装修型化学性室内空气污染物，也是一种生物内源性有机化合物。

甲醛是毒性很强的有机化合物,进入机体后,主要是损害细胞的核酸，造成不同水平遗传物质的损害；也可与体内蛋白质的氨基结合,改变蛋白质的内部结构并使其丧失活性，扰乱机体细胞的正常生理功能。

1. 实验材料

① 实验细胞：HT22细胞；

② 器械：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜、台式低速离心机；

③ 试剂：0.25% 胰蛋白酶、双抗、胎牛血清、PBS、DMEM培养基、甲醛。

2. 实验方法

① 用细胞完全培养基稀释甲醛；

② 细胞铺板24h后，弃上清分别加入含不同浓度甲醛的培养液；

③ 37℃ 5%CO2培养箱继续孵育；

④ 检测相应炎症和凋亡指标。

3. 评价方法

3.1氧化损伤指标

① ELISA检测细胞炎症因子表达(IL-1、IL-6、IL-18、TNF-α等)；

② 试剂盒检测ROS、LDH、SOD、MDA等；

③ 流式/免疫荧光检测ROS、JC-1等；

④ PCR/WB检测炎症因子基因和蛋白水平的表达等。

3.2 凋亡评价指标

① 流式检测细胞凋亡；

② TUNEL检测细胞凋亡；

③ WB检测凋亡相关蛋白的表达。

4. 经验总结

① 甲醛诱导HT22损伤，可显微镜下观察细胞形态与状态是否发生变化，诱导时间在48h内即可出现明显损伤；甲醛作用浓度与时间还需以具体实验为准。

② 甲醛是致癌有机物，操作需谨慎，废液需收集再做处理。

高浓度的乙醇可使细胞脱水、蛋白质变性和凝固。

低浓度的乙醇对细胞的损伤主要表现为:

①破坏细胞线粒体和微粒体的电子传递系统，损害其合成 ATP 的功能，激发脂质过氧化，使细胞生物膜的流动性改变;

②导致细胞基因组 DNA 断裂，抑制DNA 修复酶的功能。乙醇对肝细胞、粘膜和腺上皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、成骨细胞、神经细胞和白血病细胞等均有诱导凋亡的作用。

① 乙醇诱导HT22损伤，可显微镜下观察细胞形态与状态是否发生变化，诱导时间在48h内即可出现明显损伤；乙醇作用浓度与时间还需以具体实验为准。

② 乙醇诱导HT22损伤模型中，作用时间较短，细胞仅出现少量空泡，长期诱导可能会出现大量空泡，空泡是否为脂肪还有待进一步验证。

氧化应激是指机体内氧自由基的产生与清除失去平衡,或外源性的过量摄入导致活性氧(ROS)在体内堆积引起细胞毒性。

神经元对ROS攻击特别敏感，正常情况下，神经组织内ROS的生成和消除处于动态平衡状态。当各种不良因素作用ROS生成系统，使ROS生成过多或干扰抗氧化防御系统功能，使ROS消除障碍时，这种动态平衡遭到破坏，ROS过量，随后神经系统的结构与功能受到破坏。

① H2O2氧化损伤能力极强，要用培养基将其稀释后再作用于细胞，且作用时间不宜过长，作用浓度与时间还需以具体实验为准；

② 常规细胞活率检测不一定能选出最适宜造模浓度，但可作为参考，需同时检测多个炎症指标去评估造模是否成功。

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