时间：2020-03-16浏览次数：2407
急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）是临床上较为常见的急危重病症之一，常见于大手术后、创（烧）伤、危重病等患者中，可导致患者电解质紊乱、酸中毒及容量负荷过重，并最终可发展成为尿毒症。
肾缺血再灌注（renal ischemiareperfusion，RIR）损伤是由各种原因导致的肾脏灌注不足所致，伴随着一系列连贯的细胞事件发生，包括活性氧 (ROS) 释放、凋亡、坏死、炎症细胞的浸润和活性介质的释放，从而导致组织损伤，常见于各种类型的休克、急性肾动脉阻断或肾脏移植等临床治疗过程，是临床上导致 AKI 的最常见原因。
实验前准备
动物：8-12周龄C57BL/6雄性小鼠。
注意：尽管不同品系都可用于造模实验，但是不同性别动物对缺血再灌注损伤的反应差异较大，必须使用同一性别的动物。
试剂：4%水合氯.醛；生理盐水；肝素钠（1000 units/ml）；无菌纱布；碘酒；4%PFA（多聚甲.醛）；伊红；苏木素。
手术器械：组织剪刀（钝头，11.5cm）；止血钳（直头，12cm）；非创伤性微型血管夹（夹颚长6mm，宽1mm，总长17mm）
其他器械：25g针头；1ml注射器；纱布海绵；棉签；带线缝合针（4-0丝线）；电动刮毛刀。
造模步骤
一、麻醉
动物禁食16-18h，8ul/g腹腔注射4%水合氯.醛麻醉。
二、开腹
动物麻醉后，腹部朝上摆放，用医用胶布固定四肢，电动刮毛刀褪去腹部毛发，70%酒精对腹部表皮进行消毒。从箭突末端沿腹中线向下剪开3cm切口，暴露腹腔。注意：切口不能超过箭突，该处皮肤与肌肉中汇集大量血管，破损会导致动物大量失血。用止血钳分别夹住切口两侧和箭突并拨开，尽量暴露腹腔。Tips：可用纱布垫高止血钳，以抬高腹壁，便于观察。
三、暴露血管
用生理盐水湿润纱布和棉签。取两块湿润的纱布置于切口右侧（动物左侧）。用湿润的棉签非常轻柔地将小鼠的肠道从腹腔从推至旁边的纱布上，使门静脉充分地暴露。再取一块湿润的纱布覆盖肠道，以防干燥。用剪刀仔细地剪开方肝叶与左肝叶之间的联结组织，以更好地暴露第一肝门（门静脉，肝动脉，胆管）（如Figure 1）。必要时，需将中肝叶和左肝叶往膈膜方向铺开，以方便观察左肝叶与方肝叶的联结。
手术示意图
Quadratelobe（方肝叶）；right lateral lobe（右肝叶）；median lobe（中肝叶）；left lateral lobe（左肝叶）。图中所示为动物开腹后，将中肝叶和左肝叶向膈膜方向铺开情况下腹面的示意图。肝静脉为蓝色；肝动脉为红色；胆管为黄色。
四、夹闭血管
肝门中找到右肝叶分支，并在右肝叶分支上方用血管夹夹闭门静脉，肝动脉和胆管。夹闭后，中肝叶和左肝叶（体积约占整个肝脏70%）的颜色会很快由赤褐色变成苍白。若中肝叶和左肝叶颜色没有发生明显变化，则取下夹子重新夹闭。夹子放置的深度很重要。肝动脉的深度比门静脉要深。
注意：夹子反复使用多次后，其金属刚性的改变会减小夹闭力，因此在使用夹子的过程中，要时刻关注夹子的老化问题，并及时更换。
五、生理状态维持
成功完成血管夹放置后，用湿润的棉签轻轻的将肠道推回腹腔内，向腹腔内滴加500μl 10U/ml肝素钠生理盐水溶液，用生理盐水湿润的纱布覆盖切口。将动物转移到加热灯或加热垫下，是动物体温维持在37℃。在缺血过程中紧密看护动物，防止动物体温下降，并确保覆盖的纱布保湿湿润。期间为防止动物苏醒可向腹腔滴加少量麻醉剂（50μl）。
六、结束缺血
实验设定的缺血时间结束后，轻轻将血管夹取出，向腹腔内滴加500μl生理盐水，以补充手术过程中的体液损失。
注意：再灌注会使肝脏在血管夹取出后数十秒后很快恢复正常的赤褐色。若夹闭的时间过长有可能造成血液回流受阻。
七、缝合切口
取出血管夹后，对切口进行双层缝合。实验设定的再灌注时间结束时处死动物采样保存。
实验结果：肝脏HE染色图片
左侧Sham为假手术对照肝脏。右侧为经过1小时缺血+6小时再灌注处理肝脏。其中黑色虚线所圈区域为坏死区。坏死区内出现干细胞坏死、空泡化、核固缩等情况。
参考文献
Mouse model of liver ischemia and reperfusion injury: method for studying reactive oxygen and nitrogen metabolites in vivo.[J]Free Radical Biology and Medicine Volume 46, Issue 1, 1 January 2009, Pages 1–7。
需确认的信息
1. 模型种属（大鼠还是小鼠或是其他种属）
2. 动物体重有无要求，年龄有无要求
3. 雌雄有无要求
4. 模型构建具体方案
5. 取材要求（采血、取组织样本）
