类器官包埋切片

类器官（Organoids）指利用成体干细胞或多能干细胞进行体外三维（3D）培养而形成的具有一定空间结构的组织类似物。尽管类器官并不是真正意义上的人体器官，但能在结构和功能上模拟真实器官，能够最大程度地模拟体内组织结构及功能并能够长期稳定传代培养。

一、类器官收集

1）类器官收集（例如24孔板，收集6-8孔类器官，大约1000-2000个类器官）

加入1ml PBS重悬移入1.5ml离心管，300g 4℃离心5min弃去液体。

二、类器官固定

1）PFA固定

三、类器官琼脂糖包埋

1）称量0.2至0.4g琼脂糖，加入至烧杯或者小试剂瓶内，加入10ml左右PBS。微波炉高火融化，每隔5s暂停打开，观察，重复数次至琼脂糖融化完全。

四、类器官石蜡包埋

6）切片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般是5-8um厚，并用小镊子将包含有完整组织的切片置于40°C温水中；
7）捞组织：组织受热展开，最好是组织不起皱纹，用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2，一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的，每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用，这样形成的误差就比较小了，而且捞载玻片的时候最好方向一致，以便观察，再将捞出来的载玻片置于架子上，放入37°C温箱中烘干。