时间：2020-12-31浏览次数：3325
目前临床所用的抗肿瘤药中，大多数是经动物移植性肿瘤试验筛选而发现的。应用动物移植性肿瘤筛选药物的优点是：使一群动物同时接种同样量的瘤细胞，生长速率比较一致，个体差异较小，接种成活率近100%，对宿主的影响相类似，易于客观判断疗效，可在同种或同品系动物中连续移植，长期保留供试验用，试验周期一般均较短，试验条件易于控制等。因此目前抗肿瘤药筛选大多数采用动物移植瘤作为筛选模型。
实验中常用腹水瘤和实体瘤两种方式进行移植。对于会产生腹水的肿瘤，可将其一定数量的细胞注入受体动物腹腔形成腹水瘤或产生腹水。实体瘤移植也是在无菌条件下，把实体瘤切成2～3mm小块，植于受体动物皮下。
一、造模方法
裸鼠腹水瘤模型的核心是通过移植肿瘤细胞或组织至腹腔，模拟人类恶性肿瘤（如卵巢癌、肝癌、胃癌）的腹水生成和转移过程。常用造模方法包括：
1. 细胞悬液注射法
步骤：
选择高侵袭性肿瘤细胞系（如人卵巢癌细胞SKOV3、肝癌H22、胃癌SGC-7901），制备单细胞悬液（浓度通常为1×10⁶~1×10⁷ cells/mL），注射0.1~0.2 mL至裸鼠腹腔（4-6周龄，BALB/c nude鼠最常用）。
特点：
操作简单、成瘤率高（7-14天腹水明显），适用于药物敏感性和腹水生成机制研究。
关键点：
细胞活力需>95%，注射体积需精准以避免腹膜刺激。
2. 组织块移植法
步骤：
将实体瘤组织切割为1-2 mm³小块，通过腹腔手术植入裸鼠大网膜或腹膜表面。
特点：
模拟肿瘤微环境更真实，但操作复杂，成瘤周期较长（3-4周）。适用于研究肿瘤间质相互作用。
3. 基因编辑模型
方法：
利用CRISPR/Cas9或慢病毒载体在肿瘤细胞中敲入/敲除特定基因（如VEGF、EGFR），再注射至裸鼠腹腔。
应用：
研究特定基因对腹水形成的调控作用，例如敲低VEGF可显著减少腹水体积。
4. 人源化PDX模型
步骤：
将患者来源的肿瘤组织（PDX）移植至免疫缺陷鼠，待形成实体瘤后取腹水传代。
优势：
保留原发肿瘤异质性，适用于个体化治疗研究。
二、机制通路与关键蛋白
腹水形成涉及肿瘤细胞增殖、血管生成、淋巴管阻塞及炎症反应，以下为核心通路及蛋白：
1. 血管生成与通透性调控
VEGF/VEGFR通路：
VEGF（血管内皮生长因子）通过结合VEGFR-2，激活PI3K/AKT和MAPK通路，促进血管内皮细胞增殖及血管通透性增加，导致血浆蛋白渗入腹腔形成腹水。
关键蛋白：VEGF-A、VEGFR-2、HIF-1α（缺氧诱导因子）。
临床关联：贝伐珠单抗（抗VEGF单抗）已用于治疗卵巢癌腹水（NCT03019510）。
2. 肿瘤细胞侵袭转移
MMPs/EMT通路：
肿瘤细胞通过上皮-间质转化（EMT）获得迁移能力，MMP-2/9降解细胞外基质（ECM），促进腹膜播散。
关键蛋白：MMP-2/9、E-cadherin（下调）、N-cadherin（上调）。
临床关联：MMP抑制剂（如Marimastat）在临床试验中显示抑制腹水生成潜力。
3. 炎症与免疫逃逸
IL-6/STAT3通路：
肿瘤细胞分泌IL-6激活STAT3，促进自身增殖并抑制免疫细胞（如T细胞）浸润。
关键蛋白：IL-6、STAT3、PD-L1（免疫检查点）。
临床关联：托珠单抗（抗IL-6R）联合化疗正在评估中（NCT04524871）。
4. 淋巴管阻塞与压力失衡
LYVE-1/Podoplanin通路：
肿瘤阻塞腹膜淋巴管（标记物LYVE-1、Podoplanin），导致淋巴回流障碍，腹水积聚。
关键蛋白：LYVE-1、Podoplanin（淋巴管内皮标志物）。
三、相关临床研究
1. 靶向VEGF的药物
贝伐珠单抗：III期临床试验（GOG-0218）显示其联合化疗可延长卵巢癌患者无进展生存期，并减少腹水复发。
2. EGFR抑制剂
厄洛替尼：在胃癌腹水模型中抑制EGFR磷酸化，临床试验（NCT01732276）显示可降低腹水生成率。
3. 免疫检查点抑制剂
帕博利珠单抗（抗PD-1）：针对腹膜转移性胃癌的II期试验（NCT02901301）显示部分患者腹水消退。
四、模型评价与局限性
优势：
快速模拟腹水病理过程，适用于药效评价（如腹水量、生存期）及机制研究。
局限性：
裸鼠缺乏完整免疫系统，无法完全模拟人体免疫微环境；部分细胞系（如H22）为鼠源性，与人肿瘤存在差异。
裸鼠腹水瘤模型通过不同造模方法模拟肿瘤腹水形成的多环节机制，核心通路涉及VEGF、MMPs、IL-6等靶点，其研究成果已推动抗血管生成药物和免疫治疗的临床应用。未来趋势包括开发人源化模型及多组学分析（如单细胞测序）以揭示腹水异质性。
