细胞培养

时间:2018-10-30浏览次数:5517

细胞培养

从体内组织取出细胞,在体外培养使其生长繁殖并维持其结构和功能的一种培养技术。


细胞培养的意义

1. 是细胞生物学研究中最基础、最基本的一项技术,可以用来进行药物筛选、疫苗生产、抗体制备等。

2. 可以模拟复杂的生命活动机制   in vitro(体外)-in vivo(体内)。最主要是大部分实验无法把活体作为实验对象,因此需要首先在细胞水平进行研究,再从体内进行验证。

3. 可以通过细胞培养获得大量实验细胞,进而研究实验细胞的信号转导、物质及能量代谢以及细胞的增殖凋亡等。

 

常见细胞培养类型

1. 原代细胞培养:

从生物体组织、器官中分离得到的原代细胞,通过机械方法、酶、螯合剂(如EDTA)来处理分散成单细胞,置于培养基中进行培养,注意原代培养的贴壁依赖性细胞需要使用促进贴壁的包被培养皿(如使用多聚赖氨酸),从而帮助细胞贴壁,促进细胞的生长和增殖。。


2. 贴壁细胞培养:

贴壁培养主要适用于贴壁依赖性的细胞,细胞贴附于培养皿的表面生长,当生长铺满平面时会发生接触抑制,此时就需要对细胞进行传代处理。传代方式也是采用酶消化法,可根据具体需要,选择是否使用多聚赖氨酸铺皿来促进细胞贴壁生长。


3. 悬浮细胞培养:

悬浮培养主要适用于非贴壁依赖性的细胞,细胞或者细胞的聚集体悬浮于培养液中,悬浮培养是一种大规模细胞培养的理想方式。悬浮培养需要保持良好的分散状态,因此需要再振荡的条件下培养,形成分散良好的悬浮培养物。当细胞培养至一定密度时需进行传代,传代时需去除较大的细胞聚集体和残渣物。


4. 干细胞的培养:

干细胞具有自我更新和自我维持的能力,可以无限次地进行增殖分裂,是一类尚未充分分化多潜能的细胞,在一定条件下,可以分化成多种功能细胞。根据干细胞的类型选择贴壁培养或悬浮培养的方式,通常干细胞生长于铺有辅助附着的细胞外基质的成分(如明胶、基质胶或胶原蛋白等)或是MEF饲养层的培养皿上,除了这类传统的二维培养技术,还可以使用三维的培养技术来模拟生物机体内环境,可根据不同的细胞类型来进行培养条件的优化和分析。

 

结果展示

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大鼠神经元原代细胞                                       人脐静脉内皮细胞

 

实验完成周期及交付标准

1. 实验周期:一般细胞培养时间为2-5天,特殊细胞培养根据细胞说明书而定。原代细胞需要购买动物提取组织进行分离和消化,一般时间为1-2周。

2. 交付标准:细胞图片、实验报告(试剂、耗材、实验步骤)

 

需确认的信息

1. 需要培养细胞的具体名称?

2. 客户是否提供细胞还是我方代购?

3. 细胞培养只是为本实验获得标本,我们需要具体对细胞进行哪些具体生物学功能检测?如增殖、凋亡、迁移、侵袭等。

 

文献参考

[1] https://www.atcc.org/,细胞培养说明书ATCC网址。

[2] Autophagy modulates temozolomide-induced cell death in alveolar Rhabdomyosarcoma cells

[3] Erlotinib in Previously Treated Non–Small-Cell Lung Cancer 


晶莱生物服务流程


晶莱生物实验服务项目

动物实验细胞生物学病理实验
消化系统模型细胞培养病理染色
胃酸分泌模型普通细胞株HE染色
脓毒症模型细胞缺氧培养油红O染色
胃溃疡模型细胞培养+支架番红固绿染色
胰腺炎模型干细胞培养Masson染色
肝纤维化模型原代细胞分离/提取/培养天狼猩红染色
DIO肥胖模型细胞转染/病毒感染PAS糖原染色
胆结石模型Trans well共培养阿利新蓝染色
结肠炎(UC)模型细胞增殖甲苯胺蓝染色
脂肪肝模型细胞计数尼氏染色
急性肝损伤模型生长曲线测定LFB髓鞘染色
免疫、代谢系统疾病模型存活曲线测定普鲁士蓝染色
骨质疏松模型ccK-8增殖检测VG染色
糖尿病模型MTT增殖检测EVG染色
高尿酸血症模型CFSE检测增殖-流式检测VonKossa染色
呼吸系统模型BrDU检测-免疫荧光法刚果红染色
肺纤维化模型细胞凋亡苏丹黑B染色
慢性肺阻塞模型Annexin V/PI流式检测细胞凋亡Trap染色
急性肺损伤模型WB检测凋亡相关蛋白抗酸染色
哮喘模型透射电镜观察凋亡小体革兰氏染色
肺栓塞模型Tunel染色(POD法,DAB显色)AB-PAS染色
支气管炎模型Tunel(荧光法,含试剂盒)亚甲基蓝染色
泌尿生殖系统模型DNA ladder法苯胺蓝染色
慢性肾衰模型细胞周期荧光 DAPI染色
急性肾衰模型细胞显微计数普鲁士蓝染色
肾间质纤维化模型PI染色间苯二酚碱性品红染色
肾结石模型BrdU渗入法银染
肾炎模型免疫荧光染色黑色素染色
子宫内膜异位症模型PI流式检测细胞周期镀银染色
心血管系统模型细胞运动PASM 六胺银染色
冠心病模型Transwell检测细胞迁移VG染色
心肌梗死模型Transwell检测细胞侵袭富尔根染色
心脏骤停模型细胞划痕亚甲基蓝染色
慢性心力衰竭模型细胞克隆碘-碘化钾染色
动脉粥样硬化模型集落形成法/稀释铺板方法Goldner三色法染色
白血病模型软琼脂克隆法PAS-萘酚磺S染色
高血压模型毛细管克隆法改良苯酚品红染色
神经系统模型体外实验血管生成网状纤维染色
脑卒中模型磁珠分选细胞β-半乳糖苷酶染色
栓塞性脑梗死模型流式分选细胞镀银染色
脑出血模型开机费movat五色染色
脑损伤模型单色维多利亚蓝染色
脊髓损伤模型双色免疫组化
帕金森模型CBA多细胞因子流式检测免疫组化预式
老年痴呆模型组织/血液细胞制备免疫组化正式
应激模型组织单细胞制备免疫荧光(石蜡-单标)
骨骼疾病模型中性粒细胞提取免疫荧光(石蜡-双标)
骨折模型其他样本细胞制备(如血液等)免疫荧光(石蜡-三标)
骨缺损模型外周血PBMC分离免疫荧光(冰冻-单标)
风湿免疫性关节炎模型线粒体组学免疫荧光(冰冻-双标)
骨关节炎模型线粒体膜电位检测-流式法制片前处理
五官疾病模型线粒体膜电位检测-免疫荧光法石蜡组织包埋
眼科疾病模型线粒体ROS生物含量检测--流式特殊包埋(细胞、材料、眼球等)
鼻腔疾病模型线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等)
皮肤疾病模型线粒体通透性转换孔(mPTP)骨组织脱钙(小)
皮肤损伤模型溶酶体免疫荧光法骨组织脱钙(大)
肿瘤疾病模型线粒体+溶酶体共定位骨组织EDTA脱钙(小)
原位瘤模型内质网骨组织EDTA脱钙(大)
转移瘤模型线粒体钙瞬时变化检测-流式石蜡白片
皮下植瘤模型ATP检测细胞爬片

ADP检测

AMP检测



流式DNA/RNA半定量检测基因编辑工具
组织细胞悬液处理pcr检测mRNA合成(3保1)片段/质粒/引物合成
细胞处理microRNA检测质粒载体构建
血液标本处理LncRNA表达量的检测过表达腺病毒载体构建包装
细胞刺激培养CirRNA表达量的检测shRNA腺病毒载体构建包装
单色检测凝胶电泳过表达慢病毒载体构建包装
双色检测基因合成shRNA慢病毒载体构建包装
Annexin V/PI凋亡<300过表达腺相关病毒载体构建包装
细胞周期300-1,500shRNA腺病毒载体构建包装

1500 - 5000稳转细胞株

>5000

特殊序列



ELISAWBqPCR
组织匀浆处理蛋白提取及定量一RNA抽提
ELISA(不含试剂盒)48T/kitWB检测一(10孔膜/指标)mRNA引物设计及合成
ELISA(不含试剂盒)96T/kit灰度值分析及作图一(10孔膜/指标)miRNA引物设计及合成
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit蛋白提取及定量二LncRNA引物设计及合成
ELISA(含国产试剂盒)96T/kitWB检测二(15孔膜/指标)CircRNA引物设计及合成

灰度值分析及作图二(15孔膜/指标)mRNA RT-qPCR


miRNA RT-qPCR


LncRNA RT-qPCR


CircRNA RT-qPCR

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